解放军总医院呼吸科（100853） 佘丹阳 刘又宁

    克隆一株临床分离的多药耐药阴沟肠杆菌的ampC 基因，并研究其编码的AmpCβ-内酰胺酶的特性。聚合酶链反应（PCR）扩增阴沟肠杆菌ECLC074 的ampC 基因，将扩增的目标片段连接入pMD18-T进行双链测序后，进一步克隆入pACYC184 质粒，用获得的pACYC184/ampC 重组质粒转化大肠杆菌MC4100。采用琼脂稀释法测定阴沟肠杆菌ECLC074，大肠杆菌 MC4100 及大肠杆菌 MC4100 重组菌的抗生素敏感性，采用三维试验及等电聚焦电泳研究β-内酰胺酶的特性。结果显示：DNA 测序及限制性酶切分析结果表明，阴沟肠杆菌ECLC074 的ampC 基因已被克隆入pACYC184 质粒，大肠杆菌 MC4100 重组菌和阴沟肠杆菌ECLC074 均产生一种等电点为7.8 的β-内酰胺酶，该酶具有AmpCβ-内酰胺酶的耐药表型特征。结果表明：阴沟肠杆菌的ampC 基因可以被克隆入pACYC184 质粒，并能在大肠杆菌 MC4100 中表达，这为深入研究染色体AmpCβ-内酰胺酶创造了条件。